From 2464239f02a8782cac6f552d4bd8ca6383e8b2d6 Mon Sep 17 00:00:00 2001 From: gbouras13 Date: Sun, 12 Jan 2025 22:03:33 +1030 Subject: [PATCH] Fix #90 add support for contig ends with dnaapler all --- HISTORY.md | 2 +- pyproject.toml | 2 +- src/dnaapler/__init__.py | 11 +- src/dnaapler/utils/VERSION | 2 +- src/dnaapler/utils/all.py | 406 +- src/dnaapler/utils/processing.py | 124 + src/dnaapler/utils/validation.py | 8 +- tests/test_data/contig_ends/GN04821.fasta | 99454 ++++++++++++++++++++ 8 files changed, 99814 insertions(+), 195 deletions(-) create mode 100644 tests/test_data/contig_ends/GN04821.fasta diff --git a/HISTORY.md b/HISTORY.md index eb2083b..893e936 100644 --- a/HISTORY.md +++ b/HISTORY.md @@ -3,7 +3,7 @@ # 1.0.1 (2024-11-22) * Thanks to the inimitable @[rrwick](https://github.com/rrwick), v1.0.1 is a patch fixing a string-parsing bug. -* If your contig headers were integers, `dnaapler` did not rotate the found `BLAST/MMseqs2` hits. This was pre-existing (not introduced by v1.0.0). +* If your contig headers were integers, `dnaapler` did not rotate the found `BLAST/MMseqs2` hits. This was a pre-existing issue (not introduced by v1.0.0). # 1.0.0 (2024-11-21) diff --git a/pyproject.toml b/pyproject.toml index 7174561..a96053a 100644 --- a/pyproject.toml +++ b/pyproject.toml @@ -1,6 +1,6 @@ [tool.poetry] name = "dnaapler" -version = "1.0.1" # change VERSION too +version = "1.1.0" # change VERSION too description = "Reorients assembled microbial sequences" authors = ["George Bouras "] license = "MIT" diff --git a/src/dnaapler/__init__.py b/src/dnaapler/__init__.py index 7595383..68b1c3d 100755 --- a/src/dnaapler/__init__.py +++ b/src/dnaapler/__init__.py @@ -21,6 +21,7 @@ ) from dnaapler.utils.constants import DNAAPLER_DB from dnaapler.utils.external_tools import ExternalTool +from dnaapler.utils.processing import rotate_input from dnaapler.utils.util import ( begin_dnaapler, check_duplicate_headers, @@ -841,7 +842,7 @@ def bulk( default="all", type=click.STRING, callback=validate_choice_db, - help="Lets you choose a subset of databases rather than all 3. Must be one of: 'all', 'dnaa', 'repa', terl', 'dnaa,repa', 'dnaa,terl' or 'repa,terl' ", + help="Lets you choose a subset of databases rather than all 4. Must be one of: 'all', 'dnaa', 'repa', terl', 'cog1474', 'dnaa,repa', 'dnaa,terl', 'repa,terl', 'dnaA,cog1474', 'cog1474,terl', 'cog1474,repa', 'dnaa,cog1474,repa', 'dnaa,cog1474,terl' or 'cog1474,repa,terl'", show_default=True, ) @click.option( @@ -968,9 +969,14 @@ def all( else: custom_db = None + # rotate all replicons by half the length of the contig + # the rotated input for MMSeqs2 will have the original contigs + the rotated ones with suffix "rotated_" + rotated_input = os.path.join(output, "rotated_input.fasta") + rotate_input(input, rotated_input) + # runs bulk MMseqs2 run_bulk_MMseqs2( - ctx, input, output, prefix, gene, evalue, threads, custom_db=custom_db + ctx, rotated_input, output, prefix, gene, evalue, threads, custom_db=custom_db ) # rerorients MMseqs2 @@ -998,6 +1004,7 @@ def all( autocomplete, seed_value, custom_db=custom_db, + gene=gene, ) # end dnaapler diff --git a/src/dnaapler/utils/VERSION b/src/dnaapler/utils/VERSION index 7f20734..1cc5f65 100644 --- a/src/dnaapler/utils/VERSION +++ b/src/dnaapler/utils/VERSION @@ -1 +1 @@ -1.0.1 \ No newline at end of file +1.1.0 \ No newline at end of file diff --git a/src/dnaapler/utils/all.py b/src/dnaapler/utils/all.py index c14543e..d1154d7 100644 --- a/src/dnaapler/utils/all.py +++ b/src/dnaapler/utils/all.py @@ -10,8 +10,11 @@ from loguru import logger from dnaapler.utils.processing import ( + choose_highest_mmseqs2_bitscore, reorient_sequence_and_append, reorient_single_record_bulk, + rotate_coordinate_backward, + rotate_sequence, ) @@ -24,6 +27,7 @@ def all_process_MMseqs2_output_and_reorient( autocomplete: str, seed_value: int, custom_db: str, + gene: str, ) -> None: """Processes the MMseqs2 output, reorients and saves all contigs into os.path.join(output, f"{prefix}_reoriented.fasta") @@ -32,6 +36,7 @@ def all_process_MMseqs2_output_and_reorient( :param output: output directory :param prefix: prefix :param ignore_list: list containing contigs (short_contig) to ignore + :param gene: list of genes to consider :return: """ @@ -80,6 +85,8 @@ def all_process_MMseqs2_output_and_reorient( # make an empty df to ensure autocomplete reorientation happens MMseqs2_df = pd.DataFrame(columns=col_list) + chosen_contig_list = choose_highest_mmseqs2_bitscore(MMseqs2_df, gene=gene) + # Initialize the list to store the IDs contigs = [] genes = [] # for the gene it reoriented it by @@ -91,20 +98,17 @@ def all_process_MMseqs2_output_and_reorient( coverages = [] idents = [] identitys = [] + rotateds = [] reoriented_output_file = os.path.join(output, f"{prefix}_reoriented.fasta") # Read the FASTA file and extract the IDs for record in SeqIO.parse(input, "fasta"): contig = record.description + contigs.append(contig) + rotated = False # need this to match for MMseqs2 short_contig = record.id - contigs.append(contig) - - # Filter the DataFrame where 'qseqid' matches 'contig' - filtered_df = MMseqs2_df[MMseqs2_df["qseqid"] == short_contig] - - length_of_df = len(filtered_df) if short_contig in ignore_list: # write contig anyway @@ -122,194 +126,223 @@ def all_process_MMseqs2_output_and_reorient( coverages.append(message) idents.append(message) identitys.append(message) + rotateds.append(message) - # no hits at all then autcomplete - elif length_of_df == 0: - if autocomplete == "none": - # write contig anyway - with open(reoriented_output_file, "a") as out_fa: - SeqIO.write(record, out_fa, "fasta") - - # no hit save for the output DF - message = "No_MMseqs2_hits" - genes.append(message) - starts.append(message) - strands.append(message) - top_hits.append(message) - top_hit_lengths.append(message) - covered_lens.append(message) - coverages.append(message) - idents.append(message) - identitys.append(message) - + else: + rotated = False + + if short_contig in chosen_contig_list: + # length won't be 0 + # Filter the DataFrame where 'qseqid' matches 'contig' + filtered_df = MMseqs2_df[MMseqs2_df["qseqid"] == short_contig] + length_of_df = len(filtered_df) + elif f"rotated_{short_contig}" in chosen_contig_list: + rotated = True + filtered_df = MMseqs2_df[ + MMseqs2_df["qseqid"] == f"rotated_{short_contig}" + ] + length_of_df = len(filtered_df) + # rotate the record seq + # Create a rotated version of the sequence to match the MMSeqs2 input + index = len(record.seq) // 2 + record.seq = rotate_sequence(record.seq, index) else: - message = f"autocomplete_method_{autocomplete}" - (start, strand) = run_autocomplete_record( - record, autocomplete, reoriented_output_file, seed_value - ) + length_of_df = 0 + + if length_of_df == 0: + if autocomplete == "none": + # write contig anyway + with open(reoriented_output_file, "a") as out_fa: + SeqIO.write(record, out_fa, "fasta") + + # no hit save for the output DF + message = "No_MMseqs2_hits" + genes.append(message) + starts.append(message) + strands.append(message) + top_hits.append(message) + top_hit_lengths.append(message) + covered_lens.append(message) + coverages.append(message) + idents.append(message) + identitys.append(message) + rotateds.append(message) - if strand == 1: - strand_eng = "forward" - else: - strand_eng = "negative" - - genes.append(message) - starts.append(start) - strands.append(strand_eng) - top_hits.append(message) - top_hit_lengths.append(message) - covered_lens.append(message) - coverages.append(message) - idents.append(message) - identitys.append(message) - - else: # there is at least one MMseqs2 hit - # determine the numbers of repA, dnaA and terL - - # UniRef90 is in string for repA - # phrog is in string for terL - # DNAA is in string for dnaA - - # counts - counts = { - "dnaA": filtered_df[ - filtered_df["sseqid"].str.contains("DNAA", case=False) - ].shape[0], - "terL": filtered_df[ - filtered_df["sseqid"].str.contains("phrog", case=False) - ].shape[0], - "repA": filtered_df[ - filtered_df["sseqid"].str.contains("UniRef90", case=False) - ].shape[0], - "cog1474": filtered_df[ - filtered_df["sseqid"].str.contains("cog1474", case=False) - ].shape[0], - } - - # if there are hits to more than 1 of dnaA, terL, repA, implement logic - # to prefer dnaA, repA then terL (in that order) - if (counts["dnaA"] > 0) + (counts["terL"] > 0) + (counts["repA"] > 0) + ( - counts["cog1474"] > 0 - ) >= 2: - # prefer dnaA if it is greater than zero - if counts["dnaA"] > 0: - # keep only the hits where dnaA is found - filtered_df = filtered_df[ - filtered_df["sseqid"].str.contains("DNAA") - ] - # else prefer cog1474 - archaea if it is greater than zero - elif counts["cog1474"] > 0: - filtered_df = filtered_df[ - filtered_df["sseqid"].str.contains("cog1474") - ] - # otherwise where there is repA and terL, keep repA else: - filtered_df = filtered_df[ - filtered_df["sseqid"].str.contains("UniRef90") - ] - - # reset the index if you want to re-index the filtered DataFrame - filtered_df.reset_index(drop=True, inplace=True) - - # top hit has a start of 1 ######## - # take the top hit - MMseqs2 sorts by bitscore - # if the start is 1 of the top hit - if filtered_df["qstart"][0] == 1: - # update the record description to contain 'rotated=True' akin to how unicycler does it - record.description = record.description + " rotated=True" - - # writes to file - with open(reoriented_output_file, "a") as out_fa: - SeqIO.write(record, out_fa, "fasta") - - # no hit save for the output DF - message = "Contig_already_reoriented" - - genes.append(message) - starts.append(message) - strands.append(message) - top_hits.append(message) - top_hit_lengths.append(message) - covered_lens.append(message) - coverages.append(message) - idents.append(message) - identitys.append(message) - - # top hit - # prokaryotes can use AUG M, GUG V or UUG L as start codons - e.g. for Pseudomonas aeruginosa PA01 dnaA actually starts with V - # Therefore, I will require the start codon to be the 1st in the searched sequence match - unlikely to not be but nonetheless - # Sometimes, the top hit might not be the actual gene of interest (e.g. in phages if the terL is disrupted - like SAOMS1) - # so in these cases, go down the list and check there is a hit with a legitimate start codon - # I anticipate this will be rare usually, the first will be it :) - else: - # get gene - # set as dnaA by default - gene = "dnaA" - - # for archaea - if "cog1474" in filtered_df["sseqid"][0]: - gene = "cog1474" - # for plasmids - if "UniRef90" in filtered_df["sseqid"][0]: - gene = "repA" - # for phages - if "phrog" in filtered_df["sseqid"][0]: - gene = "terL" - # custom - if custom_db is not None: - gene = "custom" - - # update the record description to contain 'rotated=True' akin to how unicycler does it - record.description = ( - f"{record.description} rotated=True rotated_gene={gene}" - ) - - if filtered_df["qseq"][0][0] in ["M", "V", "L"] and ( - filtered_df["sstart"][0] == 1 - ): - ( - start, - strand, - top_hit, - top_hit_length, - covered_len, - coverage, - ident, - identity, - ) = reorient_single_record_bulk( - filtered_df, - reoriented_output_file, - record, - overlapping_orf=False, + message = f"autocomplete_method_{autocomplete}" + (start, strand) = run_autocomplete_record( + record, autocomplete, reoriented_output_file, seed_value ) - else: # top hit doesn't have a valid start codon - get most overlapping CDS - ( - start, - strand, - top_hit, - top_hit_length, - covered_len, - coverage, - ident, - identity, - ) = reorient_single_record_bulk( - filtered_df, - reoriented_output_file, - record, - overlapping_orf=True, + if strand == 1: + strand_eng = "forward" + else: + strand_eng = "negative" + + genes.append(message) + starts.append(start) + strands.append(strand_eng) + top_hits.append(message) + top_hit_lengths.append(message) + covered_lens.append(message) + coverages.append(message) + idents.append(message) + identitys.append(message) + identitys.append(message) + rotateds.append(message) + + else: # there is at least one MMseqs2 hit + # determine the numbers of repA, dnaA and terL + + # UniRef90 is in string for repA + # phrog is in string for terL + # DNAA is in string for dnaA + + # counts + counts = { + "dnaA": filtered_df[ + filtered_df["sseqid"].str.contains("DNAA", case=False) + ].shape[0], + "terL": filtered_df[ + filtered_df["sseqid"].str.contains("phrog", case=False) + ].shape[0], + "repA": filtered_df[ + filtered_df["sseqid"].str.contains("UniRef90", case=False) + ].shape[0], + "cog1474": filtered_df[ + filtered_df["sseqid"].str.contains("cog1474", case=False) + ].shape[0], + } + + # if there are hits to more than 1 of dnaA, terL, repA, implement logic + # to prefer dnaA, repA then terL (in that order) + if (counts["dnaA"] > 0) + (counts["terL"] > 0) + ( + counts["repA"] > 0 + ) + (counts["cog1474"] > 0) >= 2: + # prefer dnaA if it is greater than zero + if counts["dnaA"] > 0: + # keep only the hits where dnaA is found + filtered_df = filtered_df[ + filtered_df["sseqid"].str.contains("DNAA") + ] + # else prefer cog1474 - archaea if it is greater than zero + elif counts["cog1474"] > 0: + filtered_df = filtered_df[ + filtered_df["sseqid"].str.contains("cog1474") + ] + # otherwise where there is repA and terL, keep repA + else: + filtered_df = filtered_df[ + filtered_df["sseqid"].str.contains("UniRef90") + ] + + # reset the index if you want to re-index the filtered DataFrame + filtered_df.reset_index(drop=True, inplace=True) + + # top hit has a start of 1 ######## + # take the top hit - MMseqs2 sorts by bitscore + # if the start is 1 of the top hit + if filtered_df["qstart"][0] == 1: + # update the record description to contain 'rotated=True' akin to how unicycler does it + record.description = record.description + " rotated=True" + + # writes to file + with open(reoriented_output_file, "a") as out_fa: + SeqIO.write(record, out_fa, "fasta") + + # no hit save for the output DF + message = "Contig_already_reoriented" + + genes.append(message) + starts.append(message) + strands.append(message) + top_hits.append(message) + top_hit_lengths.append(message) + covered_lens.append(message) + coverages.append(message) + idents.append(message) + identitys.append(message) + rotateds.append(rotated) + + # top hit + # prokaryotes can use AUG M, GUG V or UUG L as start codons - e.g. for Pseudomonas aeruginosa PA01 dnaA actually starts with V + # Therefore, I will require the start codon to be the 1st in the searched sequence match - unlikely to not be but nonetheless + # Sometimes, the top hit might not be the actual gene of interest (e.g. in phages if the terL is disrupted - like SAOMS1) + # so in these cases, go down the list and check there is a hit with a legitimate start codon + # I anticipate this will be rare usually, the first will be it :) + else: + # get gene + # set as dnaA by default + gene = "dnaA" + + # for archaea + if "cog1474" in filtered_df["sseqid"][0]: + gene = "cog1474" + # for plasmids + if "UniRef90" in filtered_df["sseqid"][0]: + gene = "repA" + # for phages + if "phrog" in filtered_df["sseqid"][0]: + gene = "terL" + # custom + if custom_db is not None: + gene = "custom" + + # update the record description to contain 'rotated=True' akin to how unicycler does it + record.description = ( + f"{record.description} rotated=True rotated_gene={gene}" ) - # save all the stats - genes.append(gene) - starts.append(start) - strands.append(strand) - top_hits.append(top_hit) - top_hit_lengths.append(top_hit_length) - covered_lens.append(covered_len) - coverages.append(coverage) - idents.append(ident) - identitys.append(identity) + if filtered_df["qseq"][0][0] in ["M", "V", "L"] and ( + filtered_df["sstart"][0] == 1 + ): + ( + start, + strand, + top_hit, + top_hit_length, + covered_len, + coverage, + ident, + identity, + ) = reorient_single_record_bulk( + filtered_df, + reoriented_output_file, + record, + overlapping_orf=False, + ) + + else: # top hit doesn't have a valid start codon - get most overlapping CDS + ( + start, + strand, + top_hit, + top_hit_length, + covered_len, + coverage, + ident, + identity, + ) = reorient_single_record_bulk( + filtered_df, + reoriented_output_file, + record, + overlapping_orf=True, + ) + + if rotated: + start = rotate_coordinate_backward(start, len(record.seq)) + + # save all the stats + genes.append(gene) + starts.append(start) + strands.append(strand) + top_hits.append(top_hit) + top_hit_lengths.append(top_hit_length) + covered_lens.append(covered_len) + coverages.append(coverage) + idents.append(ident) + identitys.append(identity) + rotateds.append(rotated) # write the example info to file # @@ -325,6 +358,7 @@ def all_process_MMseqs2_output_and_reorient( "Coverage": coverages, "Identical_AAs": idents, "Identity_Percentage": identitys, + "Overlapping_Contig_End": rotateds, } # Convert the dictionary to a DataFrame and save output diff --git a/src/dnaapler/utils/processing.py b/src/dnaapler/utils/processing.py index 6c84089..aa084e7 100644 --- a/src/dnaapler/utils/processing.py +++ b/src/dnaapler/utils/processing.py @@ -1,5 +1,6 @@ import os from pathlib import Path +from typing import List import pandas as pd import pyrodigal @@ -8,6 +9,129 @@ from loguru import logger +def choose_highest_mmseqs2_bitscore(MMseqs2_df: pd.DataFrame, gene: str) -> List[str]: + """ + Chooses the contigs from original and rotated with the highest bitscore hits to choose for downstream reorientation. + + Args: + MMseqs2_df (pd.DataFrame): DataFrame containing MMSeqs2 results. + gene (Union[str, List[str]]): Gene or list of genes to filter for. Default is "all". + + Returns: + List[str]: List of chosen contig identifiers. + """ + + chosen_contig_list = [] + + def sort_by_order(item_list, order): + return sorted( + item_list, key=lambda x: order.index(x) if x in order else len(order) + ) + + if gene == "all": + keywords = ["DNAA", "cog1474", "UniRef90", "phrog"] + else: + keywords = gene.split(",") + + unique_qseqids = MMseqs2_df["qseqid"].unique() + + for qseqid in unique_qseqids: + + if qseqid.startswith("rotated_"): + # Check if there is no matching original seqid + original_id = qseqid[len("rotated_") :] + if original_id not in unique_qseqids: + chosen_contig_list.append(qseqid) + else: + for keyword in keywords: + + rotated_id = f"rotated_{qseqid}" + + # Get rows for the original and rotated qseqid + original_rows = MMseqs2_df[ + MMseqs2_df["sseqid"].str.contains(keyword, case=False, na=False) + & (MMseqs2_df["qseqid"] == qseqid) + ] + rotated_rows = MMseqs2_df[ + MMseqs2_df["sseqid"].str.contains(keyword, case=False, na=False) + & (MMseqs2_df["qseqid"] == rotated_id) + ] + + if not original_rows.empty: + original_max_bitscore = ( + original_rows["bitscore"].max() + if not original_rows.empty + else -float("inf") + ) + else: + original_max_bitscore = 0 + if not rotated_rows.empty: + rotated_max_bitscore = ( + rotated_rows["bitscore"].max() + if not rotated_rows.empty + else -float("inf") + ) + else: + rotated_max_bitscore = 0 + + if rotated_max_bitscore > 0 or original_max_bitscore > 0: + + # Compare the max bitscore + # if the rotated is higher + if rotated_max_bitscore > original_max_bitscore: + result = f"{qseqid}: rotated (keyword '{keyword}', max bitscore: {rotated_max_bitscore})" + chosen_contig_list.append(rotated_id) + # usual + else: + result = f"{qseqid}: original (keyword '{keyword}', max bitscore: {original_max_bitscore})" + chosen_contig_list.append(qseqid) + break + + break # Stop once a keyword matches + + return chosen_contig_list + + +def rotate_sequence(sequence, rotation): + """Rotate a sequence by the given number of characters.""" + return sequence[rotation:] + sequence[:rotation] + + +def rotate_coordinate_backward(x_prime, seq_length): + """Map the rotated coordinate x' back to the original.""" + return (x_prime - seq_length // 2) % seq_length + + +def rotate_input(input: Path, out_file: Path) -> None: + """ + Rotates the input contigs by half the length of each contig + + Args: + input (Path): Input file containing a nucleotide sequence. + out_file (Path): Output file to save the rotated sequence. + + Returns: + None + """ + with open(out_file, "w") as output_handle: + for record in SeqIO.parse(input, "fasta"): + # Write the original sequence + SeqIO.write(record, output_handle, "fasta") + + # Create a rotated version of the sequence + index = len(record.seq) // 2 + rotated_seq = rotate_sequence(record.seq, index) + + # Create a new record for the rotated sequence + rotated_record = record[:] + rotated_record.id = f"rotated_{record.id}" + rotated_record.seq = rotated_seq + rotated_record.description = "" + + # Write the rotated sequence + SeqIO.write(rotated_record, output_handle, "fasta") + + def process_MMseqs2_output_and_reorient( input: Path, MMseqs2_file: Path, out_file: Path, gene: str ) -> bool: diff --git a/src/dnaapler/utils/validation.py b/src/dnaapler/utils/validation.py index bf88f22..9cde694 100644 --- a/src/dnaapler/utils/validation.py +++ b/src/dnaapler/utils/validation.py @@ -229,10 +229,10 @@ def validate_choice_db(ctx, param, value): "cog1474", "dnaA,cog1474", "cog1474,terl", - "repa,cog1474", - "dnaa,repa,cog1474", - "dnaa,terl,cog1474", - "repa,terl,cog1474", + "cog1474,repa", + "dnaa,cog1474,repa", + "dnaa,cog1474,terl", + "cog1474,repa,terl", ] if value not in choices: raise click.BadParameter(f"Invalid choice. Choose from {', '.join(choices)}") diff --git a/tests/test_data/contig_ends/GN04821.fasta b/tests/test_data/contig_ends/GN04821.fasta new file mode 100644 index 0000000..8fd8cbd --- /dev/null +++ b/tests/test_data/contig_ends/GN04821.fasta @@ -0,0 +1,99454 @@ +>NZ_CP147557.1 Pseudomonas aeruginosa strain GN04821 chromosome, complete genome +GTGTCGAGCGATCCCTACGAGCCGGAAGAACCCAGCATCGATCCGCTGGCCGCCGCCATGCCGGCCGGAG +CAGCGCCTGCGGTGCGCACCGAGCGCAACGTCCAGGTCGAAGGTGCGCTGAAGCACACCAGCTATCTCAA +CCGTACCTTCACCTTCGAGAACTTCGTCGAGGGCAAGTCCAACCAGTTGGCCCGCGCCGCCGCCTGGCAG +GTGGCGGACAACCTCAAGCACGGCTACAACCCGCTGTTCCTCTACGGTGGCGTCGGTCTGGGCAAGACCC +ACCTGATGCATGCGGTGGGCAACCACCTGCTGAAGAAGAACCCGAACGCCAAGGTGGTCTACCTGCATTC +GGAACGTTTCGTCGCGGACATGGTGAAGGCCTTGCAGCTCAACGCCATCAACGAATTCAAGCGCTTCTAC +CGCTCGGTGGACGCACTGTTGATCGACGACATCCAGTTCTTCGCCCGTAAGGAGCGCTCCCAGGAGGAGT +TCTTCCACACCTTCAATGCCCTTCTCGAAGGCGGCCAGCAGGTGATCCTCACCAGCGACCGCTATCCGAA +GGAAATCGAAGGCCTGGAAGAGCGGCTGAAATCCCGCTTCGGCTGGGGCCTGACGGTGGCCGTCGAGCCG 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